CAMERA DI BURKER PDF

Camera di Burker – Burker chamber. Done. Error loading comments. Retry. views. 20 faves. comments. Taken on April 13, All rights reserved. Camera di Burker. By Di. Lab. – Service Veterinaria · Updated about 2 years ago. strumento indispensabile in qualsiasi laboratorio, sopratutto veterinario. In commercio esistono vari tipi di camere contaglobuli, ma sicuramente la più conosciuta è la camera di Burker. Questa viene utilizzata come strumento per il co.

Author: Sarg Meztisar
Country: Canada
Language: English (Spanish)
Genre: Politics
Published (Last): 3 September 2009
Pages: 294
PDF File Size: 5.8 Mb
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ISBN: 744-2-53748-768-3
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Unable to load video. Please check your Internet connection and reload this page. If the problem continues, please let us know and we’ll try to help. An unexpected error occurred. Il metodo si basa su quantificare la percentuale di lattato deidrogenasi LDH in frazioni cellulari sedimentabili rispetto ai livelli LDH cellulari totali.

Click here for the english version. For other languages click here. Inoltre, sono disponibili i risultati tipici e validazione sperimentale del metodo in condizioni che inducono autofagia in vari tipi di cellule di mammiferi coltivate.

Durante l’autofagia alla rinfusa, autofagosomi sequestrano il citosol e quindi anche proteine citosoliche solubili, a fianco di altri carichi autofagici. Autofagosomi possono sequestrare materiale citoplasmico sia casuale non-selettivi dell’autofagia e le buone maniere selettiva selective autofagia. Bulk autofagia molto probabilmente rappresenta un mix di autofagia selettivo e non selettivi.

Utilizzando queste analisi, Seglen definito e caratterizzato diverse fasi del pathway autofagico-lisosomiale 45scoperto e coniato il amphisome 6 il prodotto della fusione di endosome-autofagosoma e fu il primo a descrivere il ruolo della fosforilazione della proteina nell’autofagia regolamento 7.

In modo ottimale tali dosaggi dovrebbero essere ampiamente applicabili, ben definito e facile da eseguire. In maniera graduale, abbiamo trasformato gradualmente il dosaggio in un metodo facile e versatile.

File:Hemocytometer with gloved hand.JPG

In secondo luogo, il metodo era sostanzialmente ridimensionato 39. Questo permesso simultaneamente un downscaling ulteriormente del metodo, il punto di partenza originale di usando un piatto di 10 cm per esempio 16 all’utilizzo di un singolo pozzo da una piastra pozzetti per campione vale a direcirca 15 volte meno a partire materiale In quarto luogo, abbiamo identificato un’apparecchiatura di elettroporazione commerciale che potrebbe sostituire il condensatore scarica elettrica su misura Per uno schema globale di flusso del protocollo intero, Vedi Figura 1.

Please recommend JoVE to your librarian. Insieme, questi numeri danno un’indicazione di cosa aspettarsi quando si esegue il test di sequestro di LDH in cellule di mammifero. Nel complesso flusso schema del protocollo sequestro LDH. Il protocollo si basa su un formato di cameea di coltura del tessuto pozzetti, utilizzando i volumi indicati per campione da un pozzetto. ABB, dopo buffer di esplosione Vedi punto 3.

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Convalida del dosaggio LDH sequestro utilizzando composti d’inibizione dell’autofagia. A LNCaP, cellule o sono state lasciate non trattati ai fini della sottrazione di sfondo: Dopo 3 ore di camra, le cellule sono state raccolte e sequestro di Ci tassi sono stati determinati come dettagliato nel protocollo corrente. LDH sequestro tassi sono stati determinati dopo 3 ore di trattamento. Rispetto per l’originale metodo 1216abbiamo rimosso una serie di passaggi inutili, semplificato molti dei passaggi rimanenti e presentare un downscaling sostanziale.

In tal caso, si potrebbe risparmiare tempo per snap-congelare i campioni in azoto liquido nel passaggio 3.

Camera di Burker – Wikipedia

Il forte, ma breve, scosse elettriche delle cellule in soluzione isotonica, privo di ioni, si traduce in una rottura uniforme e selettiva della membrana plasmatica, pur lasciando la struttura intracellulare e organelli compresi i vacuoli autofagici intatto 12 Quando si verifica un nuovo tipo di cella, si consiglia di verificare l’efficienza byrker Vedi punto 3. Non usando l’analisi in 20 tipi differenti delle cellule dei mammiferi, abbiamo mai modificare le impostazioni di electroporator.

D’importanza, tuttavia, uno studio recente ha segnalato che attivatori dell’autofagia selettiva inducono un aumento simile sequestro citosolico del carico alla rinfusa come il sequestro del carico specifico Risultati burkwr nostro bjrker sono d’accordo con questo nostri dati non pubblicati. Analizzando il sequestro delle proteine citosoliche solubili ad es. Gli inibitori di efficienti di degradazione di LDH includono inibitori della pompa protonica come agenti Baf o concanamycin un 31618 e lysosomotropic come clorochina e cloruro di ammonio Per ridurre al minimo il rischio di influenza non specifico, si consiglia di utilizzare concentrazioni dell’inibitore che sono solo a livelli di saturazione e di includere l’inibitore solo per le ultime ore 3 — 4 h dell’esperimento.

La concentrazione saturante di Baf dovrebbe essere determinata per ogni tipo di cellula. La limitazione sarebbe che l’organismo deve tollerare il trattamento con un inibitore della degradazione lisosomiale di LDH, e che il periodo di tempo tra tale trattamento e la prestazione del dosaggio dovrebbe essere relativamente breve, per ridurre al minimo i potenziali effetti non specifici di l’inibitore. Interessante, uno studio iniziale di Kominami et al.

Inoltre, a differenza del saggio di sequestro di LDH, tali approcci possono essere usati per visualizzare autofagica sequestro in singole cellule. Potenti piattaforme microscopiche potrebbero consentire anche per analisi di screening ad alta resa. Infine, considerando che il dosaggio di sequestro di LDH fornisce un’uscita diretta quantitativa della percentuale sequestrato cytosol, i metodi basati su immagine generalmente non possono fornire questo tipo di output quantitativa assoluta.

Sarebbe consigliabile fare uso di entrambi i tipi di approcci in modo complementare. Di conseguenza, un numero di controllo i trattamenti devono essere regolarmente inclusi, ad esempio, inibitori chimici di autofagia lisosomiale o degradazione proteasomica e genetica interferenza con l’autofagia 3 Come accennato nell’introduzione, l’autofagia alla rinfusa e Parkin-dipendente mitophagy non richiedono LC3 proteine della famiglia 91011 Seglen per discussioni costruttive metodologiche.

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Camera di Burker

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Utilizzare la stessa punta della pipetta per riempire immediatamente una conteggio diapositiva di camera e contare le celle in un contatore di cellule automatizzato.

Preparare un’adeguata diluizione Vedi nota sotto della sospensione delle cellule dal punto 1. Per gli esperimenti che devono essere entrambi trattati e raccolto 2 giorni dopo la semina, seme 2. Per le cellule che aderiscono liberamente, ricoprire le piastre con il tipo di rivestimento consigliato per il tipo di cella in questione. In generale, punto 1. Eseguire trattamenti sperimentali a wells duplicate o triplicate per condizione.

Calculation of seminal concentration using Burker chamber – Kubus S.A.

Lasciare una serie di pozzi non trattata al fine di definire livelli di fondo di sedimentabili LDH. Per trattamenti sperimentali che hanno una durata di solo 3 — 4 h come quelli esemplificati in punto 1. Mescolare agitando la piastra immediatamente dopo l’aggiunta di Baf. Trasferire immediatamente la sospensione cellulare per provette per microcentrifuga da 1,5 mL sul ghiaccio.

Questo dovrebbe contenere citosol di eccezionale purezza, definito “cella sap” Eseguire ad esempio immunoblotting per catepsina B 21citocromo c e isomerasi del bisolfuro della proteina, per verificare che l’elettroshock nel passaggio 3.

Ripetere i passaggi da 3. Utilizzare questi esempi per determinare i livelli di “totale LDH” nelle cellule. Centrifugare i campioni dal punto 4. Mix 4 parti di imidazolo freddo 65 mM piruvato di pH 7. In alternativa, esiste una vasta gamma di kit commercialmente disponibili per misurare LDH. Alcuni di loro sono basati sulla reazione enzimatica per la generazione di prodotti colorimetrici o fluorescente, che permette la rilevazione di altri mezzi di spettrofotometria UV e con altre gamme lineari di rilevazione di accoppiamento.

Durante le fasi 3. Sottrarre la percentuale di LDH sedimentato ottenuti nei campioni da cellule non trattate punto 1. A subscription to J o VE is required to view this article.

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